Dinámica de la evolución de las formas de Blastocystis spp. en un medio de cultivo simple / Dynamics of the evolution of the forms of Blastocystis spp. in a simple culture medium

Resumen Blastocystis spp. es un parásito muy frecuente en materia fecal humana, pero la naturaleza polimórfica y el número de Blastocystis en la muestra pueden complicar su detección por microscopía. El objetivo del trabajo fue describir la dinámica de los morfotipos de Blastocystis a corto plazo en un medio de cultivo simple y determinar su aplicabilidad para utilizarlo como complemento del análisis coproparasitológico y para estudios morfológicos, bioquímicos y moleculares del parásito. Se sembraron 10 muestras de materia fecal con Blastocystis en un medio Pavlova adaptado, se examinaron diariamente por examen microscópico durante 6 días y se registraron las formas y el recuento. El desarrollo fue regular y abundante y las formas fueron de tamaños variables y claramente identificables. El cultivo ensayado puede ser útil para la detección de Blastocystis cuando existan dudas diagnósticas por microscopía, para estudios de sensibilidad y especificidad diagnóstica o cuando se requiera aumentar la carga para realizar otros estudios.

Abstract Blastocystis spp. is a very frequent parasite in human fecal matter, but the polymorphic nature and the number of Blastocystis in a sample can complicate its detection by microscopy. The objective of the present work was to describe the dynamics of Blastocystis morphotypes in the short term in a simple culture medium and to determine its applicability to use it as a complement to coproparasitological analysis and for morphological, biochemical and molecular studies of the parasite. Ten stool samples with Blastocystis were cultured in an adapted Pavlova medium and examined during 6 days by microscopy to record the forms and the count. The development was regular and abundant and the shapes were of variable sizes and clearly identifiable. The tested culture could be used for the detection of Blastocystis when microscopic diagnosis is dubious, for studies of diagnostic sensitivity and specificity or when it is necessary to increase the load to perform other studies.

Resumo Blastocystis spp. é um parasita muito frequente nas fezes humanas, mas a natureza polimórfica e o número de Blastocystis na amostra podem complicar a sua detecção através do microscópio. O objetivo do trabalho foi descrever a dinâmica dos morfotipos de Blastocystis no curto prazo em um meio de cultura simples e determinar sua aplicabilidade para ser utilizado como complemento da análise coproparasitológica e para estudos morfológicos, bioquímicos e moleculares do parasita. Foram semeadas dez amostras de fezes com Blastocystis em um meio Pavlova adaptado e examinadas diariamente através de exame microscópico durante 6 dias, registrando as formas e fazendo recontagem. O desenvolvimento foi regular e abundante e as formas foram de tamanhos variáveis e claramente identificáveis. A cultura testada pode ser útil para a detecção de Blastocystis quando houver dúvidas diagnósticas por microscopia; para estudos de sensibilidade e especificidade diagnóstica ou quando for necessário aumentar a carga para a realização de outros estudos.

Peach palm plantlet growth in different culture media in a temporary immersion system / Crescimento de mudas de pupunheira em diferentes meios de cultura em um sistema de imersão temporária

ABSTRACT: Peach palm is a domesticated palm commercially important for the production of fruits and hearts of palm. Somatic embryogenesis, an effective technique for mass propagation, was successfully established for this species. Furthermore, a temporary immersion system improved plant regeneration. However, production can be further improved by understanding the peach palm's growth dynamic and modifications of culture media. The aims of this study were to evaluate the growth of plantlets cultured in different culture media in a temporary immersion system and to correlate the results with nutrient uptake during the growth period. Somatic embryo-derived young plantlets approximately 1 cm in length were cultivated for 12 weeks in a twin flask system containing MS, Y3 or N6 salts, Morel and Wetmore vitamins and 3% sucrose, with a monthly medium refreshment. Growth was measured and mineral analysis of the plantlets was carried out after 12 weeks of culture. The Y3 and MS salts were the most appropriate for the plant growth. Number of roots was 52.52% higher and the root size was 40.42% between the N6 and MS medium and the root number in Y3 medium was 37.74% greater than in MS medium, which is important for post acclimatization survival. K and Na are important elements for peach palm. N is not required at such a high concentration as in Murashige and Skoog formulation. The Chu (N6) medium did not generate high quality plantlets, possibly due to the absence of some micronutrients, like Mo, Cu and Co.

RESUMO: A pupunheira é uma palmeira comercialmente importante para a produção de palmito. A embriogênese somática, técnica efetiva para propagação massal, foi estabelecida com sucesso para essa espécie. Além disso, um sistema de imersão temporária aumentou a regeneração de plantas. Entretanto, a produção pode ser melhorada através da compreensão da dinâmica de crescimento e modificações do meio de cultura. O estudo objetivou avaliar o crescimento de plantas em diferentes meios de cultura em um sistema de imersão temporária e correlacionar os resultados com a absorção de nutrientes durante o período de crescimento. Plantas derivadas de embriões somáticos, com aproximadamente 1 cm de comprimento, foram cultivadas por 12 semanas em um sistema tipo frasco gêmeo contendo sais do MS, Y3 ou N6, vitaminas de Morel e Wetmore e 3% de sacarose, com renovação mensal do meio de cultura. O crescimento e os teores de nutrientes nas plantas foram determinados após 12 semanas de cultivo. Os sais do MS e Y3 foram os mais apropriados para o crescimento vegetal. O número e comprimento de raízes foi 52,52% e 40,42% maior no meio MS do que no meio N6, respectivamente, e o número de raízes no meio Y3 foi 37,74% maior que no meio MS, o que é importante para a sobrevivência após a aclimatização. K e Na foram os nutrientes mais importantes para a pupunheira. O N não foi requerido em altas concentrações como verificado na formulação do meio Murashige e Skoog. O meio de Chu (N6) não gerou plantas de boa qualidade, possivelmente devido à ausência dos micronutrientes Mo, Cu e Co.

Antisepsys and profilatic antimicrobial therapy in prevention of surgical site infection of horses / [Antissepsia e terapia antimicrobiana profilática no controle infeccioso do foco cirúrgico em equinos

The efficacy of an antisepsis protocol comprising chlorhexidine gluconate and ethyl alcohol in combination with prophylactic antimicrobial therapy in controlling surgical site infection in horses was studied. To that purpose, seven mixed breed horses received potassium penicillin and gentamicin at least 30 minutes prior to surgery. The surgical site was scrubbed with chlorhexidine gluconate and rinsed with ethyl alcohol. Samples were collected at four time points: (A) - before and (B) - immediately following shaving of the hair coat, (C) - at the end of antisepsis procedures, and (D) - at the end of the surgical procedure. Duration of surgery was recorded. Samples were cultured in three different culture mediums: Mitis Salivarus (Streptococcus sp.), Staphylococcus 110 (Staphylococcus sp.), and Mac Conkey (Enterobacteria). A high level of bacterial growth was observed in all culture mediums at (A) and (B), with no bacterial growth in (C). Staphylococcus sp. growth was observed in (D) in a single patient whose surgical procedure lasted for 120 minutes. Shaving of the hair coat reduced microbial flora on the surface of the skin. Antisepsis in combination with prophylactic antimicrobial therapy was effective in controlling surgical site infection in elective procedures with an average duration of 90 minutes.(AU)

Objetivou-se averiguar a eficácia do protocolo de antissepsia com clorexidina degermante e álcool etílico hidratado 70%, em associação com terapia antimicrobiana profilática, no controle microbiano do foco cirúrgico de equinos submetidos a procedimentos cirúrgicos. Foram utilizados 07 cavalos adultos de raças variadas, onde ambos receberam o mesmo tratamento (terapia antimicrobiana profilática e antissepsia com clorexidina degermante 2% e álcool etílico hidratado 70%), coletando-se amostras em quatro tempos distintos [(A - antes da tricotomia), (B - imediatamente após tricotomia), (C - ao término da antissepsia), (D - ao término do procedimento cirúrgico)]. O tempo de cada procedimento cirúrgico foi contabilizado. Foram utilizados três meios de cultura diferentes, cada um com especificidade para um tipo de crescimento bacteriano. Constatou-se alta incidência de crescimento bacteriano nos três meios utilizados nos tempos de coleta A e B. Para o tempo C, não foi observado crescimento bacteriano. No tempo D averiguou-se crescimento bacteriano do tipo Staphylococcus sp. em um único paciente, cujo tempo cirúrgico foi de 120 minutos de duração. Desta forma, a tricotomia reduziu a carga microbiana na superfície da pele. A antissepsia associada à terapia antimicrobiana profilática mostrou-se eficaz no controle microbiano do foco cirúrgico em procedimentos eletivos, com duração média de 90 minutos.(AU)

Impacto de la concentración de suero fetal bovino sobre las células epiteliales dentales / Impacto da concentração de soro bovino fetal nas células epiteliais dentárias / Impact of bovine fetal serum concentration on dental epithelial cells

Resumen El esmalte dental, tejido más duro del cuerpo humano, es formado por medio de la diferenciación de células epiteliales conocidas como ameloblastos. Recientemente, las células epiteliales dentales de incisivo de rata han sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante la formación del esmalte dental. Sin embargo, en función de los eventos estudiados es meritorio comprender su comportamiento, particularmente cuando la concentración del Suero Fetal Bovino (SFB) varia. El propósito de este trabajo es evaluar el impacto de la concentración del SFB sobre el crecimiento, proliferación y supervivencia de las células epiteliales dentales. Células epiteliales dentales fueron cultivadas en DMEM/F12, en presencia y ausencia de SFB. Observaciones morfológicas e inmunohistoquímicos de la actina, vimentina y fibronectina fueron realizados. Los resultados permitieron constatar que la ausencia de SFB afectó negativamente la proliferación de las células epiteliales dentales, pero mantuvo una expresión óptima de la actina y vimentina. Se identificó una alteración en la expresión de la fibronectina en las células tratadas en ausencia de SFB. En conclusión, la carencia de SFB disminuyo drásticamente la supervivencia, proliferación y expresión de la fibronectina en las células epiteliales dentales de rata.

Abstract Dental enamel, the hardest tissue in the human body is formed by the differentiation of epithelial cells known as ameloblasts. Recently rat incisor dental epithelial cells have been used as a cellular model of pathophysiological events during tooth enamel formation. However depending on the events studied, it is necessary to understand the behavior of these cells, particularly when the concentration of Bovine Fetal Serum (FBS) varies. The purpose of this work is to evaluate the impact of FBS concentration on the growth, proliferation, and survival of dental epithelial cells. Dental epithelial cells were cultured in DMEM/F12 culture medium in the absence and presence of 10% FBS. Morphological and immunohistochemical observations of actin, vimentin, and fibronectin were performed. The results confirm that the absence of FBS negatively affected the proliferation of dental epithelial cells but maintained an optimal expression of actin and vimentin. An alteration in the expression of fibronectin in the cells treated in the absence of FBS was identified. In conclusion, the lack of FBS dramatically decreased the survival, proliferation, and expression of fibronectin in rat dental epithelial cells.

RESUMO O esmalte dentário, o tecido mais duro do corpo humano, é formado pela diferenciação de células epiteliais conhecidas como ameloblastos. Recentemente, células epiteliais dentárias de incisivo de rato têm sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante a formação do esmalte dentário. No entanto, dependendo dos eventos estudados, é meritório entender seu comportamento, particularmente quando a concentração de soro fetal bovino (FBS) varia. O objetivo deste trabalho é avaliar o impacto da concentração de SFB no crescimento, proliferação e sobrevivência de células epiteliais dentárias. Células epiteliais dentárias foram cultivadas em DMEM / F12, na presença e ausência de SFB. Observações morfológicas e imunohistoquímicas de actina, vimentina e fibronectina foram realizadas. Os resultados permitiram confirmar que a ausência de SFB afetou negativamente a proliferação de células epiteliais dentárias, mas manteve uma ótima expressão de actina e vimentina. Uma alteração na expressão de fibronectina nas células tratadas na ausência de SFB foi identificada. Em conclusão, a falta de SFB diminuiu drasticamente a sobrevivência, proliferação e expressão de fibronectina em células epiteliais dentárias de ratos

Culture medium and inoculation methodology for the study of soft root rot caused by Phytopythium sp / Meio de cultura e metodologia de inoculação para o estudo da podridão mole de raízes causada por Phytopythium sp

ABSTRACT: Cassava (Manihot esculenta Crantz) is an important crop in Brazil and Pará is the major producer of roots. High temperature and humidity of tropical regions favor the development of various diseases, among them the cassava root rot. The objective of this study was to evaluate the effect of luminosity and culture medium on the mycelial growth and sporulation of Phytopythium sp. associated with different methods of inoculation on cassava roots. In vitro tests for pathogen growth were established in a 2 x 6 factorial design (luminosity x culture medium) with five replicates and the means were compared by t test (P≤0.05). The culture medium containing sweet cassava root produced greater mycelial development and higher pathogen sporulation and it was the most suitable medium for pathogen culture. The culture under absence of light generated better mycelial growth than culture under 12 hour of light. Regarding the type of inoculation, the response was better when deeper injuries were induced.

RESUMO: A mandioca (Manihot esculenta Crantz) é uma importante cultura para o Brasil, onde o Pará é o principal produtor de raízes. Regiões tropicais com alta umidade e temperatura favorecem o desenvolvimento de diversas doenças, como as podridões de raiz. O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito da luminosidade e de meios de cultura no crescimento micelial e na esporulação de Phytopythium sp. e analisar métodos de inoculação do patógeno em raízes de mandioca destacadas. Os ensaios in vitro foram instalados em esquema fatorial 2x6 (luminosidade x meio de cultura), com cinco repetições e as médias comparadas pelo teste t (p≤0,05). O meio de cultura contendo raiz de mandioca mansa proporcionou maior desenvolvimento micelial e maior esporulação do patógeno e é o mais adequado para o cultivo do patógeno. O cultivo sob ausência de luz gerou melhor crescimento micelial do que o cultivo sob 12 horas de luz. Quanto ao tipo de inoculação, a resposta foi melhor nas raízes que obtiveram ferimentos mais profundos.

Aquaculture biological waste as culture medium to cultivation of Ankistrodesmus gracilis (Reinsch) Korshikov / Resíduos biológicos de aquicultura como meio de cultura para o cultivo de Ankistrodesmus gracilis (Reinsch) Korshikov

Abstract Current study investigated the effectiveness of different macrophytes as culture media for Ankistrodesmus gracilis in laboratory conditions. Significant difference (p < 0.05) was reported in cell density with regard to conventional culture medium (CHU12) and macrophytes culture media. Mean cell density in NPK, Eichhornia crassipes and E. azurea media was higher (p < 0.05) than in conventional culture medium. Chlorophyll-a was higher than 1 g.L-1, except in CHU12 (0.7 ± 0.4 g.L-1) and T. domingensis (0.8 ± 0.3 g.L-1) media. Nitrate decreased sharply as from the 7th-day of the experiment. Ammonium and total phosphorus were highest in culture media and ranged between 0.4 g.L-1 (P. cordata medium) and 1.7 g.L-1 (CHU12 medium) for ammonium, and between 0.8 g.L-1 (CHU12 medium) and 1.9 g.L-1 (T. domingensis medium) for total phosphorus. Results revealed inorganic fertilizer and macrophytes combined with vitamins may be effective as culture media and strongly supports the growth of Ankistrodesmus gracilis, since cell density and biochemical composition are similar to or higher than conventional culture medium (CHU12). Macrophyte is a tool for aquaculture since biological wastes may be used with nutrients to improve the cultivation of microalgae.

Resumo O presente estudo investigou a eficácia na utilização de diferentes macrófitas como meio de cultura para Ankistrodesmus gracilis em condições laboratoriais. Foi observada diferença significativa (p < 0,05) entre a densidade celular em relação aos meios de cultura convencional (CHU12) e de macrófitas. Os meios de cultura com Eichhornia crassipes, E. azurea e NPK apresentaram densidade celular maiores (p < 0,05) que o meio de cultura convencional. Os teores de clorofila-a foram superiores a 1 g.L-1, exceto nos meios de cultura CHU12 (0.7 ± 0.4 g.L-1) e de T. domingensis (0.7 ± 0.3 g.L-1). O nitrato diminuiu acentuadamente a partir do 7º dia de experimento. Dentre os nutrientes, amônia e o fósforo total foram os mais elevados nos meios de cultura, variando entre 0.4 g.L-1 (meio de P. cordata) a 1,7 g.L-1 (meio CHU12) para amônia e, entre 0.8 g.L-1 (meio CHU12) e 1,9 gL-1 (meio de T. domingensis) para o fósforo total. Os resultados do presente estudo mostraram que o uso de fertilizantes inorgânicos e macrófitas, combinados com vitaminas, pode ser eficaz como meio de cultura no crescimento de Ankistrodesmus gracilis, uma vez que a densidade celular e a composição bioquímica foram semelhantes ou superiores ao meio de cultura convencional (CHU12). As macrófitas são ferramentas a serem adotadas na aquicultura, desde que os resíduos biológicos podem ser usados como nutrientes para melhorar o cultivo de microalgas.

Fecal culture and two fecal-PCR methods for the diagnosis of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in a seropositive herd / Cultivo fecal y dos métodos de PCR en materia fecal para el diagnóstico de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en un hato seropositivo / Cultivo fecal e dois métodos de PCR em matéria fecal para o diagnóstico de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em um rebanho soropositivo

Abstract Background: paratuberculosis is a slow-developing infectious disease, characterized by chronic granulomatous enterocolitis. This disease has a variable incubation period from 6 months to over 15 years, and is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Its detection by direct and indirect diagnostic techniques has been of special interest. Objective: to report the diagnosis and detection of MAP using several diagnostic tests in a herd of the Northern region of Antioquia, Colombia. Methods: serum samples from the study herd were analyzed, using a commercial ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit. Fecal samples were cultured by duplicate using Herrold´s egg yolk medium (HEYM), and analyzed by an end- point IS900-specific nested PCR protocol, and a commercial F57-real-time PCR kit. Results: eight out of 27 serum samples in the study herd resulted ELISA-positive. None of fecal samples resulted positive to HEYM culture by duplicate and none were found to be positive by F57-real-time PCR. Seven of the 27 fecal samples were found to be positive by end-point IS900-specific nested PCR. Agreement was found between ELISA and end-point IS900-specific nested PCR in one of the animals. Conclusion: the present study gives information about the agreement between direct and indirect MAP-detection techniques, using different matrixes from animals under the same husbandry conditions.

Resumen Antecedentes: la paratuberculosis es una enfermedad infecciosa de desarrollo lento, caracterizada por una enterocolitis granulomatosa crónica. Esta enfermedad tiene un periodo de incubación que varía entre los 6 meses hasta por más de 15 años, y es causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Su detección por técnicas diagnósticas directas e indirectas ha sido de interés especial. Objetivo: reportar el diagnóstico y detección de MAP utilizando varias técnicas diagnósticas en un hato de la región norte de Antioquia, Colombia. Métodos: se analizaron las muestras de suero del hato de estudio utilizando un kit comercial de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Las muestras de materia fecal fueron cultivadas por duplicado en Herrold´s egg yolk medium (HEYM), y analizadas mediante un protocolo de PCR anidado específico de IS900 y un kit comercial de PCR en tiempo real para F57. Resultados: ocho de las 27 muestras de suero resultaron positivas por ELISA. Ninguna de las muestras de materia fecal resultó positiva al cultivo en HEYM por duplicado ni por PCR en tiempo real para F57. Siete de las 27 muestras de materia fecal resultaron positivas a PCR anidado específico de IS900. Se encontró concordancia entre el resultado de ELISA y de PCR anidado específico de IS900 en uno de los animales. Conclusión: el presente estudio brinda información acerca de la concordancia entre técnicas directas e indirectas de detección de MAP, utilizando diferentes matrices a partir de animales bajo las mismas condiciones de manejo.

Resumo Antecedentes: a paratuberculosis é uma doença infecciosa de evolução lenta, caracterizada por uma enterocolite granulomatosa crônica. Esta doença tem um período de incubação que varia de 6 meses a 15 anos e é causada pelo Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Sua detecção por técnicas de diagnóstico diretos e indiretos tem sido de especial interesse. Objetivo: reportar o diagnóstico e a detecção de MAP utilizando várias técnicas de diagnóstico em um rebanho na região norte de Antióquia, Colômbia. Métodos: foram analisadas amostras de soro do rebanho utilizando um kit comercial de ELISA (enzyme- linked immunosorbent assay). As amostras de fezes foram cultivadas em duplicado em Herrold´s egg yolk medium (HEYM) e analisadas utilizando um protocolo de PCR aninhada específico de IS900 e um kit de PCR em tempo real comercial para F57. Resultados: oito das 27 amostras de soro foram positivas para ELISA. Nenhuma das amostras testadas na cultura de fezes HEYM duplicado foram positivas ou na PCR em tempo real para F57. Sete das 27 amostras de fezes foram positivas na PCR aninhada específica para IS900. Foi encontrada concordância entre o resultado de ELISA e PCR aninhada específica para IS900 em um animal. Conclusão: este estudo fornece informações sobre a correlação entre técnicas de detecção direta e indireta do MAP, utilizando diferentes matrizes de animais sob as mesmas condições de condução.

Concentration of ms medium and cutting of seeds on in vitro establishment of baruzeiro (Dipteryx alata Vog. ) / Concentração do meio ms e corte da semente no estabelecimento in vitro do baruzeiro (Dipteryx alata Vog. )

Savannah is the second biome in biodiversity in Brazil, presenting great vegetation endemism. Baruzeiro (Dipteryx alata Vog.), native from this biome, is an economically important species, with an incipient market due to the lack of commercial plantations. This highlights the need to develop and provide the basis for the domestication of this species. Thus, this study evaluated different concentrations of MS medium, using baruzeiro intact or cut seeds for in vitro establishment. Seeds from baruzeiro ripe fruits were decontaminated and were left intact or partially cut; subsequently, the seeds were inoculated into flasks with different concentrations of MS culture medium. The experimental design was completely randomized as a 5 x 2 factorial, consisting of 5 MS medium concentrations (0, 25, 50, 75 or 100%) and 2 types of seeds (intact or partially cut seeds), with three replications. Each experimental unit consisted of five flasks and 10 plants. After five months of incubation, the contamination of explants, seed germination, the number of fully developed plants and the dry masses of shoot and root of baruzeiros were evaluated. Intact seeds provided better results for all characteristics evaluated. The increased concentration of MS medium resulted in mass gain of plants; however, the use of MS medium 0% provided greater percentage of fully developed plants, the most interesting feature for baruzeiro in vitro establishment.

O Cerrado é o segundo bioma em biodiversidade do Brasil, apresentando grande endemismo vegetal. O baruzeiro (Dipteryx alata Vog.) é uma espécie economicamente importante, com mercado incipiente devido à escassez de cultivos comerciais. Isto deixa notória a necessidade de desenvolver e aperfeiçoar subsídios para a domesticação dessa espécie. Assim, neste trabalho, objetivou-se avaliar diferentes concentrações do meio MS, utilizando sementes de baruzeiro (Dipteryx alata Vog.) íntegras e com corte para o estabelecimento in vitro. Sementes retiradas de frutos maduros de baruzeiro foram descontaminadas e mantidas intactas ou receberam cortes parciais, sendo posteriormente inoculadas em frascos, com diferentes concentrações de meio de cultivo MS. O experimento foi instalado em sistema de delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 5 x 2 - meio MS (0, 25, 50, 75 e 100%) x tipos de sementes (sementes íntegras e sementes com corte) com três repetições, totalizando 30 parcelas. Cada unidade experimental foi constituída de cinco frascos e 10 plantas. Após cinco meses, foram avaliados: a contaminação dos explantes, a germinação das sementes, o número de plantas totalmente desenvolvidas e as massas secas da parte aérea e da raiz dos baruzeiros. As sementes íntegras proporcionaram melhores resultados, para todas as características avaliadas. O aumento da concentração do meio MS colaborou no ganho de massa das plantas, no entanto, o uso do meio MS 0% foi o que proporcionou maior percentual de plantas formadas, a característica mais interessante para o estabelecimento in vitro do baruzeiro.

Aquaculture biological waste as culture medium to cultivation of Ankistrodesmus gracilis (Reinsch) Korshikov

Abstract Current study investigated the effectiveness of different macrophytes as culture media for Ankistrodesmus gracilis in laboratory conditions. Significant difference (p 0.05) was reported in cell density with regard to conventional culture medium (CHU12) and macrophytes culture media. Mean cell density in NPK, Eichhornia crassipes and E. azurea media was higher (p 0.05) than in conventional culture medium. Chlorophyll-a was higher than 1 g.L-1, except in CHU12 (0.7 ± 0.4 g.L-1) and T. domingensis (0.8 ± 0.3 g.L-1) media. Nitrate decreased sharply as from the 7th-day of the experiment. Ammonium and total phosphorus were highest in culture media and ranged between 0.4 g.L-1 (P. cordata medium) and 1.7 g.L-1 (CHU12 medium) for ammonium, and between 0.8 g.L-1 (CHU12 medium) and 1.9 g.L-1 (T. domingensis medium) for total phosphorus. Results revealed inorganic fertilizer and macrophytes combined with vitamins may be effective as culture media and strongly supports the growth of Ankistrodesmus gracilis, since cell density and biochemical composition are similar to or higher than conventional culture medium (CHU12). Macrophyte is a tool for aquaculture since biological wastes may be used with nutrients to improve the cultivation of microalgae.

Resumo O presente estudo investigou a eficácia na utilização de diferentes macrófitas como meio de cultura para Ankistrodesmus gracilis em condições laboratoriais. Foi observada diferença significativa (p 0,05) entre a densidade celular em relação aos meios de cultura convencional (CHU12) e de macrófitas. Os meios de cultura com Eichhornia crassipes, E. azurea e NPK apresentaram densidade celular maiores (p 0,05) que o meio de cultura convencional. Os teores de clorofila-a foram superiores a 1 g.L-1, exceto nos meios de cultura CHU12 (0.7 ± 0.4 g.L-1) e de T. domingensis (0.7 ± 0.3 g.L-1). O nitrato diminuiu acentuadamente a partir do 7º dia de experimento. Dentre os nutrientes, amônia e o fósforo total foram os mais elevados nos meios de cultura, variando entre 0.4 g.L-1 (meio de P. cordata) a 1,7 g.L-1 (meio CHU12) para amônia e, entre 0.8 g.L-1 (meio CHU12) e 1,9 gL-1 (meio de T. domingensis) para o fósforo total. Os resultados do presente estudo mostraram que o uso de fertilizantes inorgânicos e macrófitas, combinados com vitaminas, pode ser eficaz como meio de cultura no crescimento de Ankistrodesmus gracilis, uma vez que a densidade celular e a composição bioquímica foram semelhantes ou superiores ao meio de cultura convencional (CHU12). As macrófitas são ferramentas a serem adotadas na aquicultura, desde que os resíduos biológicos podem ser usados como nutrientes para melhorar o cultivo de microalgas.

Alternative supplements and ms medium concentrations in the in vitro establishment of Dipteryx alata Vog / Suplementos alternativos e concentrações de meio ms no estabelecimento in vitro de Dipteryx alata Vog

Dipteryx alata Vog. (barueiro) is a native fruit of the Cerrado used in food and medicine. The species has never been domesticated and is currently at risk of extinction. Plant tissue culture is an important tool for the conservation of germplasm and for quick, large-scale propagation of quality seedlings. While, this technique has never been used with barueiro, it could be a valuable tool in the domestication of this species. The objective of this work is to evaluate concentrations of MS medium salts (25, 50, 75 and 100%) supplemented with coconut water (100 mL L-1), dwarf banana pulp (60 g L-1) or the absence of any supplement in the in vitro establishment of barueiro seeds (Dipteryx alata Vog). The experiment used a completely randomized design (CRD) with a 3x4 factorial scheme (three cultivation media types and four concentrations of MS salts) and three repetitions. The following characteristics were evaluated: germination rate, shoot length , largest root length , stem diameter , number of leaves , chlorophyll A , chlorophyll B , total chlorophyll, and the fresh and dry mass of the seedlings. The coconut water and banana pulp supplements did not improve the in vitro development of the barueiro seedlings and the full concentration of MS salts did not improve the initial development of the seedlings. However, the pure MS medium at a concentration of 25% MS salts was the best option for the in vitro establishment of Dipteyx alata.

O barueiro (Dipteryx alata Vog.) é uma fruteira nativa do bioma Cerrado e possui várias aplicabilidades, desde alimentares até medicinais. No entanto ainda não é uma espécie domesticada e encontra-se sob risco projetado de extinção. A cultura de tecidos vegetais constitui uma importante ferramenta para a conservação de germoplasma, além de proporcionar a rápida propagação de mudas de qualidade em larga escala. Porém, esta técnica não vem sendo utilizada em barueiro, podendo ser aplicada de forma valiosa contribuindo para seu processo de domesticação. Objetivou-se neste trabalho avaliar concentrações de sais do meio MS (25, 50, 75 e 100%) suplementados com água de coco (100 mL L-1), polpa de banana nanica (60 g L-1) ou ausência de suplemento no estabelecimento in vitro de sementes de barueiro (Dipteryx alata Vog). O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado (DIC) em esquema fatorial 3x4 (três meios de cultivo e quatro doses de sais MS) com três repetições. Foram avaliadas as características: taxa de germinação, comprimento da parte aérea e da maior raiz, diâmetro do caule, número de folhas, teores de clorofila A, B e total , massa fresca e massa seca das plântulas. A água de coco e a polpa de banana como suplementos não forneceram vantagens no desenvolvimento in vitro de plântulas de barueiro e a concentração plena dos sais MS não forneceram vantagens ao desenvolvimento inicial das plântulas. Portanto, o meio MS puro a uma concentração de 25% dos sais MS é a formulação que melhor se aplica para o estabelecimento in vitro de Dipteyx alata.

Protocorm development of Epidendrum fulgens (Orchidaceae) in response to different saline formulations and culture conditions / Desenvolvimento de protocormos de Epidendrum fulgens (Orchidaceae) em reposta a diferentes formulações salinas e condições de cultivo

The asymbiotic technique of orchid seeds germination is an important method of mass production of seedlings. Studies on the best culture conditions for each species are important to obtain seedlings in less time and at lower costs. Current analysis evaluates different consistencies of culture medium, saline formulations and culture conditions on the germination rate and further development of protocorms of Epidendrum fulgens. After 45 days in culture the protocorms were classified into three categories of development. The liquid saline formulation of Murashige and Skoog (1962) (MS) provided the highest germination rate (83.5%), and the Knudson formulation (1946) the lowest (10.9%). The different consistencies or conditions or culture conditions did not affect the germination rate percentage, except the Knudson medium, which resulted in the highest rate in response to the gelled consistency. Protocorms cultured in liquid MS medium with or without agitation showed the fastest development.

A técnica da germinação assimbiótica de sementes de orquídeas é um importante método de produção massal de mudas. Estudos que buscam condições de cultivo ideais para cada espécie são altamente desejados para obterem-se mudas em menor tempo e com menor custo. Este estudo objetivou testar diferentes consistências de meio de cultura, formulações salinas e condições de cultivo na porcentagem de germinação e velocidade de desenvolvimento de protocormos de Epidendrum fulgens. Após 45 dias de cultivo, os protocormos foram classificados em três categorias de desenvolvimento. A formulação salina de Murashige e Skoog (1962) (MS) líquida, sem agitação orbital, proporcionou maior taxa de germinação (83,5%), e a formulação de Knudson (1946) o menor percentual (10,9%). As diferentes consistências ou condições de cultivo não influenciaram na porcentagem de germinação, exceto para o meio Knudson, onde na consistência geleificada o percentual foi maior. Os protocormos cultivados em meio MS líquido, com ou sem agitação, apresentaram maior velocidade de desenvolvimento.

Estabelecimento e crescimento in vitro de plantas de grápia / In vitro establishment and growth of apuleia seedlings

O objetivo deste trabalho foi avaliar o estabelecimento e crescimento in vitro de plantas de grápia (Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbr.) em diferentes condições de cultivo. Sementes de grápia tratadas com ácido sulfúrico (H2SO4) por 20min foram imersas em etanol a 70% por 30s e em hipoclorito de sódio (0; 2,5 ou 5,0% de cloro ativo) por 5, 10 ou 15min. Aos 30 dias de cultivo, as sementes foram avaliadas quanto às porcentagens de desinfestação e germinação. As plantas assépticas foram transferidas para os meios de cultura WPM, MS e ½MS e avaliadas quanto ao comprimento (cm) da parte aérea e total das raízes e ao número de segmentos nodais e folhas aos 15 dias. Sementes de grápia também foram semeadas em meio de cultura WPM, suplementado com 4, 5 ou 6g L-1 de agar combinado com 10, 20 ou 30g L-1 de sacarose, e mantidos sob duas condições de luminosidade: luz durante todo o período de estabelecimento e escuro durante sete dias após a semeadura. Foram avaliados a porcentagem de germinação das sementes, o comprimento (cm) da parte aérea e total das raízes e o número de segmentos nodais e folhas aos 15 dias. Concluiu-se que os tratamentos com ácido sulfúrico e etanol foram suficientes para o estabelecimento in vitro de plantas assépticas de grápia. Plantas assépticas podem ser cultivadas em meio de cultura WPM ou MS, suplementados com 10g L-1 de sacarose e 4g L-1 de agar.

The aim of this study was to evaluate the in vitro establishment and growth of apuleia (Apuleia leiocarpa (Vogel) J. F. Macbr.) seedlings under different culture conditions. Apuleia seeds were treated with sulfuric acid (H2SO4) for 20min and disinfected by the immersion in 70% of ethanol for 30s and sodium hypochlorite with 0, 2.5 and 5.0% of active chlorine for 5, 10 and 15min. The percentage of disinfection and germination were evaluated at 30 days. Aseptic seedlings were transferred to WPM, MS and ½ MS culture medium and evaluated for shoot and root (cm) growth and number of nodal segments and leaves at 15 days. Apuleia seeds were also sown in WPM medium supplemented with 4, 5 or 6g L-1 of agar combined with 10, 20 or 30g L-1 of sucrose. The cultures were kept under two luminescence conditions: light throughout the establishment period and dark during the first seven days. The percentage of germination, shoot and root (cm) growth and number of nodal segments and leaves were evaluated at 15 days. In conclusion, the sulfuric acid and ethanol treatments were enough for the in vitro production of apuleia aseptic seedlings. The aseptic seedlings can grow in both WPM and MS medium, supplemented with 10g L-1 of sucrose and 4g L-1 of agar.

Germinação in vitro e aclimatação de plântulas de sucupira-preta (Bowdichiavirgilioides Kunth. ) / In vitro germination and acclimation of sucupira-preta seedlings(Bowdichiavirgilioides Kunth. )

Este trabalho teve como objetivos avaliar a germinação in vitro e a aclimatação de plantas de sucupira-preta (Bowdichia virgilioides). Sementes escarificadas e não escarificadas foram inoculadas em tubos de ensaio contendo meio de cultura MS ou WPM, com 100 ou 50% dos sais e vitaminas; suplementados com dois tipos de aditivos, carvão ativado e PVP, e mantidas em sala de cultura. Utilizou-se um delineamento inteiramente casualisado em esquema fatorial 2x4 (dois aditivos e quatro formulações de meio de cultura) com quatro repetições e seis sementes por repetição. Aos 30 dias obteve-se o percentual de germinação e o índice de velocidade de germinação (IVG). As plantas foram transferidas para tubetes, contendo substrato e aclimatadas em casa de vegetação, onde permaneceram durante 60 dias, sendo transferidas para casa de sombra, onde permaneceram por mais 60 dias. Aos 30, 60, 90 e 120 dias avaliaram-se o percentual de sobrevivência e a altura das mudas aclimatadas. A germinação in vitro de sementes escarificadas apresenta os maiores percentuais utilizando-se os meios de cultura MS e WPM reduzidos à metade da concentração dos sais e vitaminas. A germinação ocorre independentemente do aditivo utilizado tanto para sementes escarificadas como para as não escarificadas. A aclimatação das plantas germinadas in vitro ocorre independentemente do histórico de aditivos ou meios de cultura utilizados.

Thiss tudy objectived to evaluate the in vitro germination and acclimatization of plants sucupirapreta (Bowdichia virgilioides). Scarified and not scarified seeds were inoculated in test tubes containing culture medium MSorWPM, 100 or 50% of salts and vitamins, supplemented with two types of additives, activated charcoal and PVP, and kept in culture room. We used acompletely randomized in a 2x4 factorial design (2additives and 4culture medium formulations) with 4 replications and6 seeds per replicate. At 30 days gave the germination percentage and germination speed index(IVG). Plants were transferred to tubes containing substrate and acclimatized in a greenhouse, where they remained for 60days and transferred to a dusk house, where they remained for another 60days.At 30, 60, 90 and 120 days, we assessed the percentage of survival and seedling height acclimated. The in vitro germination of scarified seeds had the highest percentage using culture media MS and WPM halved the concentration of salts and vitamins. Germination occurred regardless of additive used both to scarified and note scarified seeds. The acclimation of plants germinated in vitro occurred regardless of additives history or culture media used.

Effect of coconut water on growth of olive embryos cultured in vitro / Efeito da água de coco no crescimento de embriões de oliveira cultivados in vitro

The experiment was carried out to determine the appropriate dose of coconut water as supplement for in vitro cultivation of zygotic embryos from 19 olive genotypes. The isolated embryos of the olive seeds were immersed on culture medium containing 0 (control), 25, 50, and 100mL L-1 of fresh and sterile coconut water and kept for 45 days under controlled environment. The percentage of germination, shoot length, number of roots, number of leaves and number of internodes were measured for all 19 olive genotypes. The ANOVA of the parameters evaluated showed significant genotypes x doses of coconut water interaction for shoot length, number of leaves and number of internodes and the dose of 100mL L-1 produced the best results overall as indicated by the means of measured parameters. However, the study showed the importance of determining the appropriate dose of coconut water for each genotype under consideration as shown by significant genotype x dose of coconut water interaction effect.

O experimento foi realizado para determinar a dose adequada de água de coco como suplemento para cultivo in vitro de embriões zigóticos de 19 genótipos de oliveira. Os embriões isolados das sementes de oliveira foram imersos em meio de cultura contendo 0 (controle), 25, 50, e 100mL L-1 de água de coco fresca e estéril, em condição de ambiente controlado durante 45 dias. A porcentagem de germinação, comprimento da parte aérea, número de raízes, número de folhas e número de internódios foram medidos para todos os 19 genótipos de oliveira. A ANOVA dos parâmetros avaliados apresentou interação significativa entre genótipos e dose de água de coco para o comprimento da parte aérea, número de folhas e número de internódios, e a dose de 100mL L-1, de forma geral, produziu os melhores resultados, como indicado pelas médias dos parâmetros analisados. No entanto, como mostra a interação significativa observada entre genótipos e tratamentos, é importante determinar a dose adequada de água de coco para cada genótipo.

Desenvolvimento de meio quimicamente definido para produção de polissacarídeo capsular em cultivo de Streptococcus pneumoniae sorotipo 14 / Development of a chemically defined medium for capsular polysaccharide production by Streptococcus pneumoniae serotype 14

Neste trabalho avaliou-se a influência de fontes de carbono (FC) e composições de meio definido no crescimento celular e na produção do polissacarídeo PS14. Em batelada, testou-se como FC glicose, sacarose e frutose em diferentes concentrações. Testou-se também meios com ausência dos aminoácidos asparagina, ácido aspártico, fenilalanina, serina, alanina, treonina, triptofano, lisina e tirosina, das vitaminas/cofatores ácido fólico, piridoxamina, ácido p-aminobenzóico, b-NAD e riboflavina, além bem como da adição de maiores concentrações de aminoácidos identificados como importantes. Em cultivo contínuo foram avaliadas vazões específicas de alimentação (D) de 0,1h-1a 0,5h-1 e a influência das bases nitrogenadas. O meio com sacarose como FC, retirada dos aminoácidos e vitaminas citados e adição do dobro de glicina isoleucina, leucina, valina e o triplo de glutamina levou à maior produção de PS14 (441mg/L). Obteve-se a maior produtividade com D=0,4h-1e a maior quantidade de PS14 com adenina na concentração original no meio de cultura.

In this work we assessed the influence of different carbon sources (CS) and defined medium compositions on cell growth and polysaccharide PS14 production. In bath, glucose, sucrose and fructose were tested at different concentrations. Also, media were tested with absence of the amino acids: asparagine, aspartic acid, phenylalanine, serine, alanine, threonine, tryptophan, lysine, and tyrosine, and vitamins/cofactors: folic acid, pyridoxamine, p-aminobenzoic acid, riboflavin and b-NAD, besides the addition of higher concentration of amino acids identified as important. In continuous cultivation, dilution rates (D) from 0.1 h-1 to 0.5 h-1 were evaluated as well as the influence of nitrogenous bases. The medium containing sucrose as CS, absence of amino acids and vitamins and addition of twice glycine isoleucine, leucine, valine, and triple glutamine led to higher production of PS14 (441mg/L). D of 0.4 h-1 showed higher productivity and adenine in standard concentration produced greater amounts of PS14.

Propagação in vitro de Hypericum cordatum (Vell. ) N. Robson (Clusiaceae) e análise fitoquímica de seus compostos secundários / In vitro propagation of Hypericum cordatum (Vell. Conc. ) N. Robson (Clusiaceae) and phytochemical analysis of its secondary compounds

Hypericum cordatum, planta com possível atividade medicinal foi analisada no presente estudo quanto a sua propagação in vitro e seus principais compostos secundários em comparação com Hypericum perforatum, espécie medicinal utilizada como antidepressivo. Diante das dificuldades que ocorrem na coleta e sua multiplicação por sementes ou via estacas caulinares, iniciou-se a propagação in vitro tendo como resultados: que a indução e o crescimento de brotações foram estimulados pelo regulador 6-benziladenina (2,0 mg L-1), que houve indução de raízes por ácido indol-butírico (0,5 mg L-1), e que as baixas concentrações de auxinas, ácido 2,4-diclorofenoxiacético, ou ácido naftalenoacético (0,01 a 0,4 mg L-1) induziram a formação de calos sendo uma alternativa viável para a multiplicação desta espécie in vitro. Constatou-se com base nas análises bioquímicas e cromatográficas realizadas nesta fase de desenvolvimento das plantas mantidas em culturas in vitro, que as mesmas não contêm hipericina. No entanto, pode-se atribuir o potencial medicinal de H. cordatum às outras substâncias que também possuem importantes atividades biológicas, tais como a xantona e o ácido clorogênico sintetizados nas glândulas foliares de H. cordatum.

Hypericum cordatum, a plant with possible medicinal activity, was analyzed in this study for its in vitro propagation and main secondary compounds, compared to Hypericum perforatum, a medicinal species used as antidepressant. Considering the difficulties that occur in its collection and multiplication through seeds or stem cuttings, in vitro propagation was started and showed the following results: the induction and the growth of sprouts were stimulated by the plant regulator 6-benzyladenine (2.0 mg L-1), there was root induction by indolebutyric acid (0.5 mg L-1) and the low concentrations of auxins, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid or naphthaleneacetic acid (0.01 to 0.4 mg L-1) induced callus formation, constituting a viable alternative for the in vitro multiplication of this species. Biochemical and chromatographic analyses carried out at this developmental stage of plants kept in in vitro cultures indicated that they do not contain hypericin. However, the medicinal role of H. cordatum can be attributed to other substances that also have important biological activities, such as xanthone and chlorogenic acid, both synthesized in the leaf glands of H. cordatum.

Uso de soro de leite bovino para elaboração de meios de cultura para Staphylococcus aureus / Culture media made by bovine whey for Staphylococcus aureus growth

Foi investigada a eficiência do cultivo de Staphylococcus aureus ATCC 25923 em meios experimentais elaborados com soro de leite bovino. Foram preparados meios líquido (caldo soro – CS) e sólido (ágar soro – AS) suplementados com cloreto de sódio (CS+NaCl e AS+NaCl) e extrato de levedura (CS+Lev eAS+Lev). No meio AS, foi testado o enriquecimento com extrato de levedura (0,1%) e diluição em água(40%) (AS+H2O+Lev). Os meios comerciais de caldo infusão cérebro coração (BHI) e ágar Baird-Parker(BP) foram utilizados como controle. A eficiência dos meios experimentais foi avaliada por determinação da biomassa e contagem de colônias, utilizando-se a cepa S. aureus ATCC 25923. Em todos os testes, o crescimento bacteriano foi compatível à quantificação observada nos meios utilizados como controle e houve desenvolvimento de colônias com características morfológicas típicas de S. aureus, principalmente no meio AS+H2O+Lev. Concluiu-se que o soro de leite bovino pode ser utilizado como componente alternativo na elaboração de meio de cultura para S. aureus.

Regeneração in vitro de melão, cv. Gaúcho / In vitro regeneration of melon, cv. Gaúcho

O objetivo do presente trabalho foi otimizar um protocolo de regeneração de explantes cotiledonares de melão, cultivar 'Gaúcho', avaliando a composição de meios de germinação e o tempo de permanência dos explantes nesses meios. Para isso, as sementes foram germinadas em meio MS semi-sólido contendo BAP ou ANA e sem esses reguladores de crescimento. As sementes permaneceram nesses meios por um, dois, três e quatro dias, sendo então seus cotilédones inoculados em meio MS contendo diferentes concentrações de BAP (0,5; 0,9; 1,5 e 2,0mg L-1). As maiores taxas de regeneração ocorreram nos cotilédones oriundos de sementes mantidas durante um e dois dias nos meios contendo 0,5 e 0,9mg L-1 de BAP. O aumento da permanência dos explantes nos meios de germinação e as elevadas concentrações de BAP nos meios de regeneração diminuíram a capacidade organogênica dos explantes e incrementaram a formação de calos.

The aim of the present study was to optimize a cv. Gaucho melon cotyledon explant regeneration protocol, evaluating the germination media composition and the explant exposition period in these media. For this purpose, seeds were germinated in semi-solid MS medium containing either BAP or ANA, and without growth regulators. The seeds were kept in these media for one, two, three or four days; afterwards, their cotyledons were inoculated in MS medium containing different BAP concentrations (0.5; 0.9; 1.5 and 2.0mg L-1). The highest regeneration rates occurred with cotyledons from seeds which had been kept for one or two days in media containing 0.5 and 0.9mg L-1 BAP. Both the increase in the explant exposition time in germination media and high BAP concentrations in regeneration media decreased explant organogenic capacity, and increased callus formation.

EMJH medium with 5-fluorouracil and nalidixic acid associated with serial dilution technique used to recover Leptospira spp from experimentally contaminated bovine semen / Meio de EMJH com 5-fluorouracil e ácido nalidíxico associado a técnica das diluições seriadas usados para recuperar Leptospira spp do sêmen bovino experimentalmente contaminado

Bovine semen experimentally contaminated with Leptospira santarosai serovar Guaricura was submitted tothe modified EMJH medium with 5-fluorouracil (300mg/L) and nalidixic acid (20mg/L), named as ôselectivemediumõ and using the serial dilution technique, in order to evaluate the percentage of recovery of the addedmicroorganism. The selective EMJH medium was found with higher percentage of recovery of leptospirasand minor losses of samples due to contamination with opportunistic microorganisms than the non-selectiveEMJH medium: 151/376 (40.0%) of positive growth; and 38/376 (10.0%) contamination and 58/376 (15%) and129/376 (34.0%), respectively. These results were statistically significant (p<0. 0001; Fisher). Differences werefound when the frequencies of positive leptospires recovery have been compared in the serial dilution technique (10-1 to 10-4) between the selective and non-selective media at different dilution factors. At 1/10th dilution the percentages found were (0%, 0/80) and (38%, 30/80), at 1/100th dilution, (3%, 2/80) and (49%, 39/ 80) and at 1/1,000th dilution, (25%, 20/80) and (50%, 40/80), respectively. The percentage of recovery of leptospires was found to be directly proportional to the dilution used. The methodology of the serial dilution technique (setting at least three dilutions) and the use of selective EMJH medium have been found to be efficient for the isolation of leptospires from the bovine semen samples.

Sêmen bovino experimentalmente contaminado com a estirpe Leptospira santarosai Sorovar Guaricura foi utilizado para verificar a porcentagem de recuperação de leptospiras, utilizandoo meio de EMJH com 5-fluorouracil (300 mg/L) e ácido nalidíxico (20 mg/L), denominado ômeio seletivoõ, associado à técnica das diluições seriadas. O meio seletivo EMJH foi encontrado comporcentagem de recuperação mais elevada e com menos perda de amostras devido à contaminação com microorganismos oportunistas quando comparado com o meio EMJH não seletivo, que foram encontrados, respectivamente, com 151/376 (40.0%) de crescimento positivo e 38/376 (10.0%) de contaminação, 58/376 (15%) e 129/376 (34.0%). Estes resultados foram estatíticamente significantes (p<0, 0001; Fisher). Diferenças foram encontradas quando as freqüências de leptospiras recuperadas foram comparadas com a técnica de diluição seriada (10-1 a 10-4) e entre os meios seletivo e não-seletivo, em diferentes níveis de diluição. À diluição de 1/10, as porcentagens encontradas foram (0%, 0/80) e (38%, 30/80); à diluição 1/100, (3%, 2/80) e (49%, 39/80); e à diluição 1/1000, (25%, 20/80) e (50%, 40/80), respectivamente. A porcentagem de recuperação de leptospiras foi diretamente proporcional às diluições empregadas. A metodologia das diluições seriadas (estabelecendo pelo menos três diluições) e o uso de meio EMJH seletivo mostraram ser eficientes no isolamento de leptospiras presentes nas amostras de sêmen bovino.

Crescimento in vitro de amoreira-preta: efeito de reguladores de crescimento e da cultivar / In vitro blackberry growing: effect of growth regulators and cultivar

Desenvolveu-se, este trabalho, no intuito de aprimorar técnicas de propagação in vitro de amoreira-preta. Testou-se em um experimento a influência de cinco diferentes concentrações de ANA (0; 0,1; 0,5; 1,0 e 1,5 mg L-1) e cinco de GA3 (0; 2; 4; 6 e 8 mg L-1), adicionadas ao meio de cultura MS, sob a amoreira-preta cultivar Ébano e; num segundo experimento testaram-se seis diferentes concentrações de ANA (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg L-1) e duas cultivares de amoreira-preta (Tupy e Brazos), no crescimento in vitro de plântulas. Segmentos nodais com 2 cm, de plântulas preestabelecidas in vitro, foram excisadas e inoculadas, em meio MS. O experimento foi inteiramente casualisado, utilizando-se três explantes por repetição e quatro repetições por tratamento. O pH do meio foi ajustado para 5,8 depois da adição de 6 g L-1 de ágar e 30 g L-1 de sacarose, ocorrendo depois a autoclavagem a 121ºC e 1 atm por 20 minutos. Após a inoculação, os tubos de ensaio foram mantidos por 60 dias, em sala de crescimento a 27 ± 1ºC, irradiância de 35 mmol.m-2.s-1 e fotoperíodo de 16 horas, avaliando-se assim o número de folhas, número de raízes, comprimento da maior raiz, comprimento da parte aérea, peso da matéria fresca e seca da parte aérea. Altas concentrações de GA3 associadas a baixas de ANA promoveram maior comprimento da parte aérea da amoreira-preta, cultivar Ébano. Maior comprimento da parte aérea de 'Brazos' foi verificado na presença de 1,0 mg L-1 de ANA. Verificou-se surgimento de calos na cultivar Ébano em todas as concentrações de GA3 associadas a 0,5-1,5 mg L-1 de ANA e nas cultivares Tupy e Brazos em todas as concentrações de ANA. Melhores resultados na micropropagação da amoreira-preta cultivares Tupy e Ébano foram obtidos com a adição de 1,0 mg L-1 de ANA e melhores resultados no enraizamento da amoreira-preta cultivar Ébano foram obtidos com baixas concentrações de ANA e na ausência de GA3.

This work was developed with the aim of improving technics of in vitro propagation of blackberry. So, one tested in an experiment the influence of five different ANA concentrations (0; 0,1; 0,5; 1,0 and 1,5 mg L-1) and five AG3 (0; 2,0; 4,0; 6,0 and 8,0 mg L-1), added to the culture medium MS, to the blackberry cv. Ebano and; in a second experiment was tested six different ANA concentrations (0; 0,1; 0,5; 1,0; 1,5 and 2,0 mg L-1) and two blackberry cv. (Tupy and Brazos), in vitro plants growing. Nodal segments with 2 cm, of in vitro plants, were excised and inoculated, in a MS culture medium. The experiment was entirely randomized blocks using three explants by repetition and four repetitions per treatment. The pH of the culture medium was adjusted for 5.8 after the addition of 6 g L-1 agar and 30 g L-1 sucrose, happening sterilization later at 121ºC and 1 atm per 20 minutes. After the inoculation, the tubes were maintained by 60 days, in growth room at 27 ± 1ºC, irradiance of 35 mol.m-2.s-1 and photoperiod of 16 hours, being evaluated the number of leaves, number of roots, length of the largest root, length of the aerial part, dry weight of the fresh and dry matter of the aerial part. High concentrations of AG3 associated to low concentrations of ANA promoted larger length of the aerial part of the blackberry cv. Ebano. Larger length of the aerial part of ' Brazos' was verified in the presence of 1.0 mg L-1 ANA. Appearance of callus was verified in blackberry cv. Ebano in all the AG3 concentrations associated to 0.5-1.5 mg L-1 ANA and in cv. Tupy and Brazos in all the ANA concentrations. Better results in the blackberry micropropagation cv. Tupy and Ebano were obtained with the addition of 1.0 mg L-1 ANA and better results in the blackberry rooting cv. Ebano were obtained with low ANA concentrations and AG3 absence.